在线脱气机接于HPLC的流动相存储液瓶与高压恒流泵之间。流动相经由在线脱气机的入口进入脱气机中，在独立的单元真空泵腔内，通过预先设定的真空度，真空泵连续低速运行，HPLC流动相在泵的作用下流经真空腔内一段很短的脱气膜管，按照Henry’s定律，在真空作用下，溶剂中溶解的气体通过管壁排出。配了在线脱气机的液相色谱仪再不需要人工超声脱气或氦气脱气。
在线脱气机由一个四通道（有四个管状塑料膜）的真空箱和一个真空泵构成。打开真空脱气机的电源开关后，控制电路即开启真空泵，真空泵运行使真空箱内产生部分真空，其压力由压力传感器测定。根据压力传感器的信号，真空脱气机通过打开或关闭真空泵来维持真空箱内的真空度。
溶剂瓶中的溶剂在泵的抽取下流过真空箱内的特殊管状塑料膜。当溶剂经过真空管时，溶剂中溶解的气体将渗过管状塑料膜进入真空箱。当溶剂离开真空脱气机的出口时，几乎已被*脱气。
在线脱气机使用的常见疑问：
1.液相色谱仪一般配原厂的在线脱气机，还是配其他品牌的脱气机？
答：如果原厂配的是在线脱气机，那么脱气效果会很好。但流行品牌液相色谱仪厂家把维修零配件的价格定的太高，难以接受。如真空泵、脱气盒在发生故障时需要更换，价格不菲。而在线脱气机的真空泵和脱气盒的价格要低的多，性能和寿命都非常高。由于在线脱气机是独立的，可配所有品牌的液相色谱仪。
2.用氦气脱气的四元液相色谱仪是否需要配在线脱气机？
答：氦气脱气也不错，但用完后还要重新买氦气，十分麻烦。如果资金充足可选择在线脱气机。
3.液相色谱仪的脱气机出现故障如何更换脱气盒？
答：由于原装脱气盒价格太高，更换费用太高。因次建议购买在线脱气机。如果是液相色谱仪，也可以用脱气盒代替原装的，价格要低很多，接口和形状都一样。