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摘要：在液相色谱方法开发过程中，经常需要改变缓冲液或改性剂浓度来优化化合 物的分离。使用配备 Blend Assist 的 Agilent 1290 Infinity 四元泵，可简化 并加速方法开发。Blend Assist 是 1290 Infinity 四元泵驱动程序中配置的软 件，可通过任意泵控制数据系统使用。因此，1290 Infinity 四元泵可以集成 到任意 Agilent 1200 Infinity 液相色谱系统中，提供方法开发能力。

本技术概述介绍将 Blend Assist 与 Agilent 1290 Infinity 四元液相色谱系 统结合，利用三元或四元梯度改变缓冲液/改性剂浓度。通过在配备 Blend Assist 的 1290 Infinity 四元液相色谱系统上优化分离，将开发的条件 直接应用于 Agilent 1290 Infinity 二元液相色谱系统，以证明保留时间和分 离的一致性。

前言：在液相色谱方法开发过程中，经常 需要改变缓冲液或改性剂浓度来优 化化合物的分离。例如，使用 1290 Infinity 二元液相色谱系统时，必须手 动混合不同的流动相，这一过程既不 方便又耗时，还容易出错。使用四元 液相色谱系统时，一个或两个通道中 可能含高浓度的改性剂或缓冲液。通 过改变该通道的流速并采用三元或四 元梯度，可以在不同运行中改变改性 剂/缓冲液浓度以找到条件。

实验 2：所用的色谱条件 色谱柱： Agilent ZORBAX RRHT Eclipse Plus C18, 4.6 × 100 mm, 1.8 µm （部件号 959964-902） 流动相： A = 水 B = 乙腈/水：80/20 C = 0.5 mol/L NaH2PO4 (60 g/L) 的水/乙腈 (80/20) 溶液，pH = 4.35，连接至 通道 A 梯度四元： 8 min 内 B 由 5% 升至 60% 流速： 1.5 mL/min 停止时间： 8.5 min 后运行时间： 3 min 进样量： 1 µL 柱温： 40 °C DAD： 220/10 nm 参比波长 360/100 nm 流通池：光程 10 mm 峰宽：> 0.013 min (20 Hz)

采集和评估软件 Agilent OpenLAB CDS ChemStation C.01.04 版和 Blend Assist Blend Assist 的参数设置和功能 Blend Assist 是 1290 Infinity 四元泵 驱动程序中配置的软件，适用于控 制该泵的任何软件。它为所有 1200 Infinity 液相色谱系统提供了方法 开发工具。关于缓冲液/改性剂浓度变 化的所有计算均自动完成。图 1 显示 了 Blend Assist 的参数界面。

激活 Blend Assist 后，必须确定应连 接在一起的通道。在本例中，将含水 的通道 A 与含 1% TFA 水溶液的通道 C 相连。将含乙腈的通道 B 与含 1% TFA 乙腈溶液的通道 D 相连。通过改变 终 TFA 浓度可以设置不同方法。图 1 显示连接的通道 A 和 C 的终浓度为 0.2%，而对于连接的通道 B 和 D， 终 TFA 浓度为 0.18%。可以将浓度单 位设置为 % 或 mmol/L。在上面的示 例中，使用的是 %。

结果与讨论：实验 1 改变 TFA 浓度以优化曲ma多及其四 种杂质的分离

利用 1290 Infinity 四元泵和 Blend Assist，无需针对水相和有机通道混 合不同的 TFA 浓度。

使用四元梯度执行下列实验：

• 将水溶液中 TFA 的浓度从 0.02% 改变为 0.05%、0.1%、0.2%， 并改变有机相中 TFA 的浓度， 但始终比水相中的浓度低 10%

• 将 Blend Assist 结果与使用 1290 Infinity 二元液相色谱系统 手动混合流动相获得的结果进 行比较

提高 TFA 浓度可显著改善曲ma多的峰 形。在水相中含 0.2% TFA 和有机相 中含 0.18% TFA 的条件下，曲ma多获 得了峰形。Blend Assist 结果与 1290 Infinity 二元液相色谱系统采用 的手动混合流动相的结果相比，二者 高度一致，如图 4 中的蓝色和红色谱 图所示。

此外，曲ma多与杂质 2 之间的分离表 明，在水相和有机相中分别使用浓度 为 0.2% 和 0.18% 的 TFA 可获得分离，如图 5 所示。

当水相中的 TFA 浓度从 0.02% 增加 到 0.2% 时，杂质 2 与曲ma多之间的 分离度从 0.48 提高至 2.83。在 1290 Infinity 二元液相色谱系统上获得的 分离度略高（蓝色谱图），分离度为 2.92，而在配备 Blend Assist 的 1290 Infinity 四元液相色谱系统上获得的 分离度为 2.83（红色谱图）。1290 Infinity 二元液相色谱系统上获得的保 留时间与 1290 Infinity 四元液相色谱系 统上获得的数值大偏差为 +0.35%。 图 6 汇总了杂质 2 与曲ma多的分离度 结果。

实验 2 改变缓冲液浓度以优化普鲁卡因 胺、乙酰普鲁卡因胺、丙吡胺和奎 尼丁的分离 执行下列实验： • 磷酸盐缓冲液浓度变化： 10 mmol/L、25 mmol/L、 50 mmol/L • 与使用 1290 Infinity 二元液相 色谱系统的手动混合流动相进 行比较

通道 C 根据流动相组成中所需的缓冲 液浓度以极低流速输送缓冲溶液。 通道 C 的流速 50 mmol/L 缓冲液：流速 = 130 µL/min 25 mmol/L 缓冲液：流速 = 65 µL/min 10 mmol/L 缓冲液：流速 = 26 µL/min 尽管通道 C 的流速极低，但具有优异 的保留时间精密度。对于通道 C，使用 10 mmol/L 缓冲液浓度和 26 µL/min 流 速的保留时间精密度 RSD 介于 0.24% 和 0.03% 之间。

结论：Agilent 1290 Infinity液相色谱 四元泵驱动程序 中配置的 Blend Assist 软件有助于在 所有 Agilent 1200 Infinity 液相色谱系 统上进行方法开发。可以在无需手动 混合不同浓度的情况下改变改性剂/缓 冲液浓度。 在一个示例中，在 1290 Infinity 四元 液相色谱系统上改变 TFA 浓度以改善 主峰峰形和杂质分离度。将开发的方 法转移到 Agilent 1290 Infinity 二元 液相色谱系统，获得了高度一致的保 留时间和分离度。在另一个示例中， 改变 1290 Infinity 四元液相色谱系 统中的磷酸盐浓度。另外，如该示例 所示，将所开发的方法转移至 1290 Infinity 二元液相色谱系统，获得了高 度一致的保留时间和分离度