菌种的保藏一般选用哪种办法?液氮罐厂家表示液氮超低温保藏法是现在保存微生物菌种牢靠的办法,多数级菌种保藏单位都采用此法。
1、准备安培管 用于液氮保藏的安培管,要求能耐受温度忽然改变而不致决裂,因而,需求采用硼硅酸盐玻璃制造的安培管。安培管的大小通常使用75×10mm的安培瓶。
2、加保护剂与灭菌 保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易涣散的细胞时,则将空安培管塞上棉塞,在压力0.11MPa,温度121℃条件下灭菌15min;若保存霉菌菌丝体则需在安培管内预先参加保护剂,如10%的甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液,参加量以能浸没今后参加的菌种块为限,而后再进行高压灭菌。
3、接入菌种 将菌种用10%的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液,装入已灭菌的安培管;霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器,从平板内切取菌落圆块,放入含有保护剂的安培管内,然后用火焰熔封。浸入水中检查有无缝隙。
4、冻住 再将已封口的安培管以每分钟下降1℃的慢速冻住至-30℃。若细胞急剧冷冻,则在细胞内会构成冰的结晶,因而下降存活率。
5、保藏 经冻住至-30℃ 的安培管当即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内,然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃,液态氮为-196℃。
6、恢复培养 保藏的菌种需求用时,将安培管取出,当即放入38~40℃的水浴中进行急剧冻结,直到全部融化为止。再打开安培管,将内容物移到适宜的培养基上培养。
综上所述,此法除了适宜于一般微生物的保藏外,对于一些用冷冻干燥法都难以保藏的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以构成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞都可长时间保藏,并且不易发作变异。缺点是需求特别设备,以上内容仅供了解,如有问题请与咱们取得联系以便及时调整。
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